
2024年9月由扬州林果业大专张万刚讲师销售团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章,研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低(P < 0.05),并表现出剂量依赖性的抑制作用,其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化,进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱怪物为该研究提供了亚硝基化淡化组学拜谱生物,助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。
中文版小标题:体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响
杂志期刊:Journal of Agricultural and Food Chemistry
2028年的影响指数公式:5.7
发布时光:2024年9月
买家公司的:南京农业大学
深入分析材料:蛋白
拜谱展示高技术:亚硝基化修饰组学
的技术路径:
一、分析結果
01.Caspase-3催化活性
如今尚不清析NO对caspase-3的调节做用会不会归因于NO介导的S-亚硝基化,不一浓硫酸浓度系数的GSNO身为外源性NO供应商,以促进caspase-3的身体之外S-亚硝基化。导致表面,与沒有GSNO的组比起,100、200和400μM GSNO组的caspase-3特异性显著性下降(图1),与之前新闻报道一致性。GSNO整理下降caspase-3特异性的暗藏主要原因仍欠缺阐述。
图1 有所差异密度的GSNO外理对caspase-3亲水性的反应
02.Caspase-3的S-亚硝基化系数
探讨分析Caspase-3的亚硝基化的情况,以具体分析GSNO对Caspase-3的发生反应性。经GSNO进行处理后,测量到caspase-3球蛋白S-亚硝基化承载力提高(图2)。这一些结杲表示,外源性GSNO培训可成功的分析caspase-3的身体之外S-亚硝基化。更让人特别的是,在如果没有GSNO产生的差表组中测量到是一个较弱的S-亚硝基化带,这表示caspase-3或者发生内源性的S-亚硝基化。凡此种种,本探讨分析中caspase-3的S-亚硝基化的情况较高,而caspase-3的活性聊天消减,这与之后的探讨分析共同。殊不知,caspase-3的活性聊天S-亚硝基化淡化位点尚不看不清楚,还必须要 进一部的经历。
图2 GSNO办理对caspase-3S-亚硝基化平均水平的引响
03.Caspase-3的S-亚硝基化位点
通过亚硝基化突显组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明,caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰(图3)。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中,分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶,其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化,说明Caspase-3易受亚硝基化修饰(图4)。此外,据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163,这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断,半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的,这可能影响蛋白降解,促进死后衰老。
图 3 caspase-3的回文字段。紫色符号的回文字段代表S-亚硝基化肽,红符号的C代表S-亚硝基化半胱氨酸
图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪
04.S-亚硝基化Caspase-3吸附结球蛋白
结淀粉酶成为种最必要的癌细胞膜骨架淀粉酶,在恢复肌癌细胞膜结构类型类型的结构类型类型完好篇性和膨胀性个方面起着最必要效用,探讨S-亚硝基化caspase-3对结淀粉酶化学分解的皮肤准确性的兼备最必要实际意义。与Std(未用胱天淀粉酶酶-3和GSNO孵育的原始肌纤维板棉淀粉酶)组好于,0 μM GSNO组(肌原纤维板棉和caspase-3的孵育,无GSNO)的完好篇结淀粉酶纯度差异性拉低,提示卡caspase-3对结淀粉酶兼备因素的淀粉酶淀粉水解的能力。在GSNO孵育后,完好篇结淀粉酶的纯度非常明显增长(P < 0.05)。虽然,当GSNO氧浓度偏高时,完好篇结淀粉酶的纯度快速调整(P < 0.05)(图5)。某些发掘认为,SNO淡化的caspase-3以标准信任的的方式限制结淀粉酶的化学分解。
图5.S-亚硝基化caspase-3可降解结核蛋白
05.S-亚硝基化Caspase- 3生物降解肌钙球蛋白-T
肌钙球淀粉酶-T (TnT)是原肌球球淀粉酶调接承接全身肌肉收宿的细细的的必不可少肌原食物玻纤球淀粉酶。TnT的可吸附的特点是判断到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化水平下,caspase-3对TnT的可吸附条件下图6图示,与Std组(不包括caspase-3和GSNO的肌原食物玻纤)相信,caspase-3组中30 kDa TnT情节有效增长,呈现caspase-3加入了TnT的可吸附,不但,caspase-3与GSNO的孵育诱发30 kDa TnT骤降。在100和200 μM GSNO组区间内不能判断到正相关的性别差异(P > 0.05),而当GSNO的氧化还原电位符合400 μM 时,该情节有效才能减少(P < 0.05)。这样的遇到呈现了SNO突显的caspase-3对TnT可吸附的抑止使用。结球淀粉酶和TnT是caspase-3的比较敏感底物,而GSNO加工处理消减caspase-3的吸附性酶或者诱发肌原食物玻纤球淀粉酶可吸附系数消减。所说所说,NO分析的S-亚硝基化能能顺利通过突显半胱氨酸残基来调接caspase-3的吸附性酶,而使进这一步导致到其对结球淀粉酶和TnT的球淀粉酶电离水平,故而导致到鸡肉的质量。
图6. S-亚硝基化caspase- 3挥发肌钙蛋清-T
二、总结
本论述于是论述S-亚硝基化对caspase-3绘制的印象力简答最后对鸡肉肌原氯纶板离体挥发的印象力。淀粉酶S-亚硝基化可能绘制caspase-3的半胱氨酸残基,于是会造成caspase-3活性酶消减,进步能够抑制了其对鸡肉肌原氯纶板淀粉酶的淀粉酶淀粉水解作用。三、拜谱总结
定量分析分为了酶活定量分析,亚硝基化遮盖组学定量分析,WB等检测工具行为,看见球血清S-亚硝基化可能遮盖caspase-3的半胱氨酸残基,这会导致了caspase-3活力的降底,并举那步限制了其对羊肉肌原氯纶球血清的球血清蛋白酶质水解性能。本定量分析为解读球血清质亚硝基化对色泽的监测管理机制带来了一个多个新的视野。拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司,可提供完善成熟的蛋清质组学、遮盖蛋清质组学、代谢转化组学、转录组学等多组学产品技术服务体系,整合多组学数据进行深入挖掘分析,全面解析机制机理等,助力高分文章发表。除此之外,拜谱生物还可提供半胱氨酸型号好产品,包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total氧化的还原故宫场景、解离巯基,欢迎大家咨询!
参看医学文献:
Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663